Aplicaciones de la Terapia Genica

GENÉTICA

Aplicaciones de la terapia génica

 

JUANA ROZALÉNa, FRANCISCO J. FERNÁNDEZ GÓMEZb, VALENTÍN CEÑAcy JOAQUÍN JORDÁN

 

aLicenciada en Químicas.bLicenciado en Farmacia.cCatedrático de Farmacología de la UCLM.dProfesor titular de Farmacología de la UCLM.Centro Regional de Investigaciones Biomédicas. Universidad de Castilla-La Mancha.

 

 

Terapia génica (TG) es la parte de la terapéutica que utiliza materialgenético en el tratamiento de enfermedades; intenta modular la funcióncelular, pudiendo corregir la deficiencia causada por la pérdida o alteraciónde un gen al modificar la expresión de proteínas. Así, secuenciascodificadoras de proteínas, sondas antisentido, ADN triples y ribozomaspueden ser considerados los fármacos de la TG. Los problemas másimportantes con los que se encuentra este conjunto de técnicas son dedistribución de estos «fármacos», es decir, la transferencia de este materiala las células diana.142 OFFARM   VOL 22  NÚM 10 NOVIEMBRE 2003ÁMBITO FARMACÉUTICOdiana en germinal o somática; delas estrategias ex vivo e in vivo, y delas aproximaciones en aditiva ysustitutiva. Así pues, cuando laTG es aplicada sobre células germinales, espermatozoides u óvulos,origina un cambio permanente entodo el organismo y en los futurosdescendientes del individuo. Suapl i c a c i ón  en  s e r e s  humano s   e sfuente de gran controversia debidoa los problemas éticos que supone.Por el contrario, el uso de la TGen células somáticas o no germinales sólo afecta al individuo tratadoy las modificaciones no son heredadas por su descendencia. Tanto en la estrategia ex vivo,donde las células diana son extraí-das y reimplantadas en el mismopaciente tras haber sido modificadas en el laboratorio, o en la invivo, donde la administración delgen corrector se realiza directamente al paciente, la TG utilizados aproximaciones: aditiva y sustitutiva. En la TG aditiva, másu t i l i z a d a   y   a v a n z a d a ,   e l   g e n   e sincorporado con sus propios elementos de regulación, mientrasque en la TG sustitutiva el gen esmantenido en su contexto natural,sometido a sus controles normalesde   e xpr e s i ón.  La  TG  adi t i v a   v ecomprometida su relativa alta eficacia por la complejidad de dotaral gen terapéutico de un controlade cuado  de   e xpr e s i ón  y  po r   e lriesgo de que la recombinación delmaterial genético dé resultados nod e s e a d o s   c o m o   l a   m u t a g é n e s i sinsercional.En la elección de la célula blancode   l a   t r ans f e r enc i a  géni c a  debetenerse en cuenta la finalidad deltratamiento, desde la corrección deun defecto en una población general celular (como en la talasemia)hasta la producción, a partir de lascélulas transducidas, de una prote-ína de secreción para la correcciónde un defecto sistémico, como enlas hemofilias. Entre las célulasmás frecuentemente utilizadas destacan los fibroblastos de la piel ylos linfocitos infiltrantes en tejidosy, como órgano diana, el hígado.Hasta el presente se han descritounas 4.000 enfermedades hereditarias, muchas de las cuales no estántodavía caracterizadas molecularmente. En ellas se encuentra ung r a n   n ú m e r o   d e   e n f e r m e d a d e sm o n o g é n i c a s   c a u s a d a s   p o r   e ldefecto de un solo gen cuyo tipode herencia sigue las pautas mendelianas. Es en este tipo de enfermedades donde la TG supone la vía másesperanzadora al éxito, ya sea curando el gen defectuoso en el tejidoq u e   n o r m a l m e n t e   l o   e x p r e s a   osuministrando a un tejido conveniente un gen funcional que desempeñe las funciones del defectuosos i n   e l imi n a r l o ,   c omo   y a   h emo sexplicado anteriormente (tabla 2). A   f i n a l e s   d e   l a   d é c a d a   d e   l o sochenta, se consideraban alteraciones idóneas para el tratamientogénico de la enfermedad de LeschNyhan, provocada por la ausenciade la enzima hipoxantina-guaninafosforribosil transferasa, e inmunodeficiencias como la PNP, provocadas por la carencia de una purinanucleósido fosforilasa o la inmunod e f i c i e n c i a   c o m b i n a d a   g r a v e   o«niños burbuja», que presentanuna falta de la enzima adenosinadesaminasa. Actualmente, se ha ampliado elnúmero de afecciones a ser tratadasmediante TG. Tan sólo las mutac i o n e s   p u n t u a l e s   e n   e l   g e n omamitocondrial son causa de más de50 patologías en humanos, entrelas que resaltamos algunas encefal omi opa t í a s ,   a c ido s i s   l á c t i c a ,   l aneuropatía óptica hereditaria deLeber, miopatía, debilidad neurogénica de músculo, ataxia, retinitispigmentosa y un largo etcétera. Enellas, basta la expresión leve de laforma correcta de los productosgénicos alterados para corregir lapatología. Unos valores ligeramente superiores de éstos no parecentener consecuencias negativas. Sirvan como ejemplo las afeccionesque a continuación detallamos.Inmunodeficiencia combinadagraveEn la inmunodeficiencia combinada grave se ha descrito un defectoen el gen que codifica una parte deun receptor celular que envía lasseñales a los progenitores de lascélulas T y NK. Sin este gen lascélulas no se desarrollan, no creceny tampoco proliferan, lo que haceque los pacientes se encuentreni n d e f e n s o s   f r e n t e   a   l a  má s   l e v ei n f e c c i ó n ,   v i é n d o s e   a b o c a d o s   avivir en el interior de una burbujaestéril («niños burbuja») a la esper a   d e   u n   t r a s p l a n t e   d e  mé d u l aósea. La corrección génica de unpequeño número de células permite recuperar toda su fuerza y repoblar toda la parte del órgano quefalla. En 1990, se aprobó en Estados Unidos el primer ensayo clínico de auténtica TG. Se trataba deintroducir el gen que codifica parala enzima adenosina desaminasa enniños que presentaban una inmunode f i c i enc i a   c ombinada  gr a v e .Un   a ñ o   d e s p u é s ,   s e   a u t o r i z ó   e lmismo tipo de ensayo en Italia, yen 1995 los dos grupos de investigación publicaban los resultadosd e   s u   e x p e r i m e n t a c i ó n   c l í n i c aponiendo de manifiesto la eficaciade la técnica de TG ex vivo en los«niños burbuja». A   p r i n c i p i o s   d e l   a ñ o   2 0 0 0 ,investigadores franceses pusieron apunto con éxito un método de TGq u e   t r a t a   l a   i nmu n o d e f i c i e n c i acombinada grave X-1 en el hombre. Dos lactantes de 8 y 11 mesesrecibieron una copia normal delgen defectuoso y, tras once mesesdesde su aplicación, los bebés presentaron un sistema inmunitarionormal y sin efectos secundarios.En este caso, los investigadoresrecolectaron médula ósea de losp a c i e n t e s   c o n   e l   f i n   d e   e x t r a e rcélulas progenitoras hematopoyé-ticas e infectarlas con un retrovirusportador del gen de reemplazo.Transcurridos tres días de infección repetida, los científicos trasplantaron las nuevas células a lospacientes y, en tan sólo 15 días, sedetectaron nuevas células portadoras de la versión correcta del gen yu n   i m p o r t a n t e   c r e c i m i e n t o   d ecélulas inmunitarias plenamentefuncionales y diversificadas. Hoydía, se mantienen abiertas variaslíneas, en todas ellas el gen a transduc i r   s igue   s i endo   l a   adeno s inadesaminasa y el vector utilizado, losretrovirus. Las diferencias estribanen el tipo de célula diana, así comoen las vías de administración.E l   d o m i n i o   a d q u i r i d o   e n   l o strasplantes de médula ósea y lacapacidad que tienen las célulasprimordiales hematopoyéticas parareconstituir totalmente la médulaVOL 22  NÚM 10 NOVIEMBRE 2003 OFFARM   143GENÉTICAósea hacen del sistema hematopoyético un candidato idóneo para elt r a t ami e n t o   g é n i c o   e n   a l g u n a shemoglobinopatías (talasemias),deficiencias de adhesión leucocitar i a   y   enf e rmedade s  de  depó s i t ol i s o s oma l   ( enf e rmedad de  Gau -c h e r ) .   L a s   h e m o g l o b i n o p a t í a srepresentan uno de los trastornosgenéticos más frecuente en humanos. Una aproximación es la expresión regulada del gen de la globina, para lo que se ha utilizado vectores retrovirales. La enfermedadd e  Ga u c h e r   e s   u n a   e n f e rme d a dautosómica recesiva, producida porel derivado proteico de un gen quecodifica la enzima glucocerebrosidasa. Aunque el trasplante alogé-nico de médula ósea ha corregidola enfermedad en algunos pacientes, en la actualidad se están llevando a cabo estudios de trasferencia génica retroviral del gen de lag l u c o c e r e b r o s i d a s a   e n   c é l u l a sm a d r e   d e   r a t ó n ,   s e g u i d a   d e   l aexpresión proteica en macrófagosdiferenciados a partir de célulasmadre transducidas.HemofiliaLa TG está resultando también eficaz en casos de hemofilia «A» y«B» donde se encuentran alteradoslos factores coagulantes VIII y IX,respectivamente. En ellas se hanrealizado aproximaciones utilizandoel transgén de estos factores y vectores retroviales, adenovirus, virusadenoasociados y ADN desnudoadministrados por vías comunescomo la subcutánea, intramuscular,intrahepática, intraperitoneal, ointravenosa. Los vectores actúan como un liberador de los factores a las célulasmus cul a r e s  de l  pa c i ent e ,  dondeproducirán continuamente este factor. Valores equilibrados de éstos enel flujo sanguíneo reducirán sustancialmente los episodios de hemorragias espontáneas y la necesaria infus i ó n   d e   e s t a s   p r o t e í n a s   e n   l o spacientes de este tipo de hemofilia.Fibrosis quísticaEn la fibrosis quística se ha observado un defecto en el gen que codifica para el canal de cloro conocidoc omo  CFTR,  que   r e sul t a   en untransporte anormal de electrólitosen las glándulas exocrinas y conduce a una enfermedad crónica obstructora de los pulmones, insufic i e n c i a   p a n c r e á t i c a   e x o c r i n a   yaumento de la cantidad de electró-litos en el sudor. Utilizando comotransgén el gen de CFTR y comocélulas diana las células del epiteliodel tracto respiratorio, se han realizado estudios utilizando liposomasy adenovirus como vectores. Losriesgos de toxicidad parecen descartados en los primeros intentos ybasta algo tan sencillo como uninhalador para conseguir la expresión del gen y aliviar en un 30%los síntomas de la enfermedad.Distrofia muscular DuchenneEn un avance significativo haciaun tratamiento para la distrofiamuscular de Duchenne (DMD),investigadores han usado TG paraproteger músculos respiratoriosvitales en ratones con la enfermedad, debido a que la mayor causade muerte en la DMD es el deter i o r o   d e l   d i a f r a g m a .   L a   n u e v ainvestigación ha demostrado porpr ime r a   v e z   c ómo   e l  di a f r agmapuede ser rescatado por medio dela inyección intravenosa con el gende la distrofina, que es defectuosoen las personas con DMD. Después del tratamiento, el músculode l  di a f r agma  de l   r a t ón mo s t r óuna expresión estable del gen de ladistrofina durante seis meses.CáncerEn el cáncer las líneas de investigación, tanto preclínicas como clí-GENÉTICA144 OFFARM   VOL 22  NÚM 10 NOVIEMBRE 2003Tabla 1. Protocolos de terapia génica aprobados por el RAC en Estados UnidosEnfermedad Gen suministrado Tejido diana Vector Enfermedades hereditarias Enfisema pulmonar Alfa-1-antitripsina Tracto respiratorio Liposomas Fibrosis quística CFTR Tracto respiratorio – AdenovirusAAV– Liposomas Hipercolesterolemia familiar Receptor LMW de lipoproteínas Hepatocitos Retrovirus Inmunodeficiencia combinada Adenosina desaminasa – Linfocitos Retrovirus grave («niños burbuja») – Células progenitoras hematopoyéticas Enfermedades adquiridas Sida (infección por VIH) – Ribozimas Linfocitos Retrovirus – ARN antisentido– Anticuerpos Restenosis (arterias periféricas) Factor tumoral de angiogénesis Células endoteliales Plásmidos Cáncer – Genes supresores de tumores – Pulmón – Retrovirus – HTK-ganciclovir – Hígado – Adenovirus– Factor de necrosis tumoral – Cerebro – Retrovirus– Interferón (gamma) – TIL – Retrovirus– Melanoma – Retrovirus nicas dentro de la TG, pueden seragrupadas en varias estrategias: –   D e s t r u c c i ó n   d e   l a s   c é l u l a stumorales mediante la expresiónd e   p r o d u c t o s   t ó x i c o s ,   o ,   e n   s udefecto, enzimas capaces de activarprofármacos, como puede ser porl a   s o b r e e x p r e s i ó n   d e   l a   e n z imatiroxina cinasa que transforma unp r o f á rma c o ,   e l   a c i c l o v i r,   e n   u nveneno.– Fortalecer y estimular la protección natural del sistema inmunitario contra las células anormalesincrementando el carácter extrañode estas células, potenciando losmecanismos del sistema inmunitario o modificando las células cancerígenas para hacerlas más susceptibles a su destrucción. – Cambi o  de l   f eno t ipo  de   l a scélulas cancerígenas, bien inhibiendo la expresión de oncogenes oaumentando la de genes supresoresde tumores, como el p53 que aparece mutado en un alto porcentajed e   t u m o r e s ,   o   i n t r o d u c i e n d o«genes suicidas» en células tumorales.– Protección de las células normales de los efectos de la quimioterapia o radioterapia. – Incremento de la cantidad ycitotoxicidad específica de los linfocitos que reaccionan con las células tumorales.L a s   p r ime r a s   a p r o x ima c i o n e sutilizaban el marcaje de linfocitosde infiltración tumoral para seguirel progreso del tratamiento contrael melanoma maligno. En 1990, seobtuvo la aprobación definitivap a r a   u n a   a p l i c a c i ó n   d e   T G   apacientes con casos avanzados demelanoma basada en experimentosex vivo con linfocitos de infiltración tumoral (TIL) procedentes delos tumores de pacientes con melanoma. Los TIL fueron introducidosen una solución de interleucina-2,una sustancia natural que potenciasu efecto destructor, y posteriormente expuestos a retrovirus quecodificaban para el factor de necros i s   t u m o r a l ,   u n a   p r o t e í n a   q u einterfiere con el suministro de sangre al tumor y debilita las célulastumorales. Los TIL activados sehospedarían en los tumores atacando las células cancerosas y, a la vez,l ibe r ando   e l   f a c t o r   ant i tumo r a lpara ayudar a exterminarlos. Sinembargo, esta aproximación presenta problemas debido a que losl i n f o c i t o s   m o d i f i c a d o s   p u e d e nqueda r   a t r apado s   en  e l  hígado ,bazo y pulmones, y la expresión noregulada en estos órganos del factor de necrosis tumoral puede originar procesos tóxicos secundarios.Alteraciones hepáticasA pesar de los problemas técnicos,existen protocolos clínicos aprobados para la transferencia ex vivo degenes al hígado, para el tratamient o   d e   l a   i n s u f i c i e n c i a   h e p á t i c aaguda e hipercolesterolemia familiar (tabla 1). Los experimentoscon ratones transgénicos, bioquí-mica y fenotípicamente modificados han permitido evaluar la eficacia terapéutica de la transferenciagénica somática de vectores adenovirales de la ornitina transcarbamilasa (OTC), beta-galactosidasa yalfa1-antitripsina humana. Una delas vías para restituir la funcionalidad del hígado cirrótico se enfocaen la degradación del exceso dea cumul a c i ón de  pr o t e ína s  de   l amatriz extracelular, principalmente colágena tipo I en el parénquima hepático. La metaloproteasa dematriz-8 o colagenasa de neutrófilos de humano es una buena candidata para ser sobreexpresada. Otraaproximación, en hígados cirróticos, la constituye el gen del activador del plasminógeno urocinasahumano modificado. Su inserciónme d i a n t e   u n   v e c t o r   a d e n o v i r a linduce la degradación del excesode matriz extracelular y estimulal a  pr o l i f e r a c i ón de  hepa t o c i t o s ,l o g r a n d o   u n   r á p i d o   r e s t a b l e c i -mi ent o  de   l a   func i ona l idad de lhígado.DiabetesLa TG mantiene abiertas dos líneas de investigación en pacientescon diabetes tipo 1, caracterizadapor una pérdida completa de lascélulas betapancreáticas. Mientrasla primera se basa en la modificación de la respuesta anómala delsistema inmunitario, la segundaint ent a   aument a r   e l  núme r o  decélulas capaces de secretar insulin a .   E n t r e   l a s   v í a s   d e   a c t u a c i ó nsobre la respuesta autoinmunitariadestacan: – Inhibición de moléculas implicadas en el desarrollo de la diabetes tipo 1 como interleucina 1beta,f a c t o r  de  ne c r o s i s   tumo r a l   a l f a ,interferón gamma, interleucina 6y óxido nítrico. – Estimular la expresión de interleucina 4 con el fin de prevenir elproceso de inflamación previo a ladestrucción de las células beta. – Inhibición de la interacción demoléculas Fas/Fas-L.– Producción local, en célulasbeta genéticamente modificadas,de moléculas anti-CD40-ligando,una proteína que desempeña unpapel clave en la activación de loslinfocitos T. Con el fin de aumentar el número de células beta, la TG ha cent r a d o   s u s   e s f u e r z o s   e n   g e n e r a rcélulas no-beta capaces de secretarinsulina en respuesta a las concentraciones de glucosa. El tipo celular donde se han obtenido resultad o s   m á s   i n t e r e s a n t e s   y   q u e   h agenerado mayores expectativas esel hepatocito. Los hepatocitos presentan la capacidad de captar laconcentración extracelular de gluc o s a ,   y a  que   c ompa r t en  c on  l a scélulas beta algunos de los component e s  na tur a l e s  de l   s i s t ema  dedetección de glucosa, como la glucocinasa y GLUT-2. Los hepatocit o s  modi f i c ado s   s on  c apa c e s  deproducir insulina con la actividadbiológica y funcional similar a laGENÉTICA146 OFFARM   VOL 22  NÚM 10 NOVIEMBRE 2003La TG mantiene abiertas dos líneas de investigación enpacientes con diabetestipo 1, caracterizada por una pérdidacompleta de las célulasbetapancreáticasde la molécula producida por elpáncreas. No obstante, debido aque las células del hígado present a n   d i f e r e n t e   s e n s i b i l i d a d   a   l aglucosa que el páncreas, las ciné-ticas (los ascensos y descensos) deproducción de la insulina obtenidas son muy diferentes a las de lainsulina nativa producida por elpáncreas, y el control de la glucosa en sangre no resulta óptimo.La introducción del gen PDX-1,implicado en las primeras fasesd e   f o r m a c i ó n   y   d e s a r r o l l o   d e lp á n c r e a s ,   y   e n   e l   c o n t r o l   d e   l aexpresión del gen de la insulinaen células beta maduras, ha resultado suficiente para que el hígadode los ratones produzca insulina,lo que ha permitido un descensode las concentraciones de glucosade los animales a los que se lesh a b í a   i n d u c i d o   l a   d i a b e t e sm e d i a n t e   e l   a g e n t e   q u í m i c oestreptozotocina. Una segunda aproximación es lamodificación de hepatocitos paraque pierdan sus características yadquieran propiedades de las células beta. Así, en células de hígadode animales de experimentación enl a s  que   s e  han  int r oduc ido  do sgenes (Neurod y Btc), se ha observ ado  que   en una  pr opo r c i ón dee l l a s   apa r e c e  una   t r a s f o rma c i ónque inducía la neogénesis de islotes, produciéndose no sólo insulina, sino el resto de las hormonas(glucagón, somatostatina y polipéptido pancreático). Además, las o b r e e x p r e s i ó n   d e   g l u c o c i n a s a ,esencial en el sistema sensor deglucosa, tanto de la célula betacomo en el hígado, modificó lascaracterísticas propias del hígado yadquirió las de la célula beta.EnfermedadesneurodegenerativasSe han realizado también aproximaciones de TG en el tratamientode la enfermedad de Alzheimer enhumanos. En cultivos primariosde neuronas piramidales de hipocampo de rata se ha sobreexpresado la proteína calbindina D28K,obteniéndose altos rendimientos.Esta proteína es capaz de unirse alion calcio modulando sus concent r a c i o n e s   c i t o p l a s m á t i c a s .   L as obr e e xpr e s i ón de   e s t a  pr o t e ínaconfirió protección a los cultivosf r e n t e   a   e s t í m u l o s   c i t o t ó x i c o scomo el fragmento 25-35 del péptido betaamiloide. También se haanalizado a pacientes en las prime r a s   e t apa s  de   l a   enf e rmedad,c o n   l a   imp l a n t a c i ó n   d e   c é l u l a scutáneas a las que previamente seles ha introducido el gen del fact o r  de   c r e c imi ent o  neur o l ógi c o(NGF) que ha mostrado resultados positivos en el deterioro cerebral en monos viejos.Otras patologías como la enfermedad de Parkinson, en la que larelación con los factores genéticose s  me n o s   c l a r a ,   r e p r e s e n t a n   u nmayor desafío. En esta enfermed a d ,   l a   T G   h a   s i d o   l l a m a d a   e l«tercer paso», tras la terapia sustit u t i v a   c o n   l a   l e v o d o p a   y   l o simplantes de células dopaminérgicas. Así, las células hiperactivasdel núcleo subtalámico son consideradas como células diana para lainserción del gen de la descarboxilasa glutámica ácida (GAD), responsable de la producción del neurotransmisor inhibitorio GABA,obteniéndose como resultado unfuncionamiento más normal de laactividad de la red cerebral. También se han realizado aproximaciones de TG ex vivo, con trasplantes decélulas capaces de producir dopamina o de secretar factores de crecimi ent o   o  neur o t r o f ina s   (BDNF,GDNF) que actúan como agentesneurotróficos, activando rutas desupervivencia celular en las neuronas afectadas.GENÉTICA148 OFFARM   VOL 22  NÚM 10 NOVIEMBRE 2003Tabla 2. Enfermedades hereditarias que pueden ser consideradas como primeras candidatas a ser tratadas por mediode la terapia génicaEnfermedad Producto normal del gen defectuoso Células a modificar por la TG Inmunodeficiencia Enzima adenosin desaminasa (ADA) Células de la médula ósea o linfocitos T combinada grave (SCID) (niños burbuja) Hemoglobinopatías b-globina de la hemoglobina Células de la médula ósea (talasemias) Hemofilia A Factor VIII de coagulación Células del hígado o fibroblastos Hemofilia B Factor IX de coagulación Células del hígado o fibroblastos Hipercolesterolemia Receptor del hígado para lipoproteínas Células del hígado familiar de baja densidad (LDL) Enfisema hereditario a-1-antitripsina (producto hepático que protege Células del pulmón o del hígado los pulmones de la degradación enzimática) Fibrosis quística Producto del gen CFTR que mantiene libre Células del pulmón de mucus los tubos aéreos de los pulmones Distrofia muscular Distrofina (componente estructural del músculo) Células musculares de Duchenne En la enfermedad de Parkinson, la TG ha sido llamada el «tercer paso», tras la terapia sustitutivacon la levodopa y los implantes decélulas dopaminérgicasUtilizando un virus de inmunodeficiencia felino sobre un modeloanimal de una enfermedad lisosoma l  humana ,   l a   enf e rmedad deSly, con déficit de enzima betaglucuronidasa que cursa con deterioro neurológico progresivo, presentó, por primera vez en este tipode investigaciones, no sólo la prevención del progreso neurológico,sino también la restauración de lascapacidades previas mentales delos animales.C o m o   ú l t i m o   e j e m p l o   d e   l a senfermedades neurodegenerativasen las que se han llevado a cabodiversas aproximaciones de TG,citaremos las ataxias, en las que seha utilizado como vector un VIHatenuado capaz de alcanzar los ganglios dorsales medulares, una de lasáreas más afectadas en la ataxia deFriedreich. Se ha planteado el usode moléculas, como el factor decrecimiento insulínico-1 (IGF-I),q u e   r e t r a s e n   l a   m u e r t e   c e l u l a robservada, planteándose la posibilidad de la regeneración neuronalmediante el uso de células madre.CegueraSe han realizado estudios en untipo de ceguera total, acompañadade degeneración de la retina, quese relaciona con mutaciones en elgen RPE95. En modelos experimentales, la administración directa en la retina de un virus portadord e l   g e n   f u n c i o n a l   e s   c a p a z   d eimpedir la degeneración y permiteque la actividad eléctrica de estaestructura ocular sea comparable al a   q u e   s e   o b s e r v a   e n   a n i m a l e ssanos. Los resultados de este estudio constituyen el primer éxitop a r a   p r e v e n i r   l a   c e g u e r a   e n   u nmamífero y tienen una importancia adicional, si consideramos quelas mutaciones del gen RPE95 seo b s e r v a n   e n   e l   h u m a n o   e n   l aceguera congénita conocida comoamaurosis de Leber. Por otro lado,la manipulación genética de células de la córnea ex vivo puede ser,en el futuro, una solución frente ala incompatibilidad y el rechazoobservado en algunos trasplantesde córnea. Hasta ahora, los experimentos realizados en animales hansido un éxito. VOL 22  NÚM 10 NOVIEMBRE 2003 OFFARM   149Sida Se han realizado aproximaciones,tanto in vivo como ex vivo, en elsida, mediante el empleo de vectores retrovirales portadores de genesde la cápside o la envoltura delVIH, como la glicoproteína 120,siendo los linfocitos T las célulasdiana. Los glóbulos blancos modificados reconocen las células infectadas por el VIH y las eliminan,tanto en las primeras etapas de lainfección como al cabo de largostratamientos antivirales. En lospr ime r o s   ens a y o s   c l íni c o s   e s t a sc é l u l a s   p u e d e n   e l i m i n a r l o   d emanera tan eficaz como lo haríanl o s   l inf o c i t o s  T  a t a c ado s  po r   e lvirus, es más, éstas son capaces deatacar eficazmente a varios mutantes del VIH.Insuficiencia cardíaca La TG viene a aumentar el abanicoterapéutico disponible en la actualidad en la insuficiencia cardíaca,abriendo las puertas a un nuevotratamiento que tiene como dianaa la proteína fosfolamban. Individuo s   c on  insuf i c i enc i a   c a rdí a c apresentan alteraciones en la regulación de esta proteína. La sobreexpresión, mediante un virus adenoasociado, de una forma mutada delgen de la fosfolamban bloquea a laproteína nativa. En estos casos seutilizó un catéter, similar al utilizado en la actualidad para practicar angioplastias, para transportarel virus hasta el lugar de acción. ArterosclerosisRe c i ent ement e   s e  ha   abi e r t o   l ap o s i b i l i d a d   d e   a p l i c a r   l a   TG  apatologías como la arteriosclerosis.La administración, mediante caté-teres espaciales, en la arteria poplí-tea de la extremidad afectada pormal riego sanguíneo de genes queexpresaban el factor de crecimiento vascular endotelial, ha sido considerada un éxito parcial. Aunquelos resultados iniciales no han sidodel todo buenos (ya que tan «sólo»consiguieron evitar la amputaciónde la pierna gangrenada durantevarias semanas), sí consiguieronrevascularizar la extremidad.Disfunción eréctil e infertilidadLa sobreexpresión de factores de crecimiento antes de una prostatectomía radical podría ayudar a repararel nervio cavernoso y, de esta manera, se podría minimizar la disfunción eréctil neuropática y preservarla capacidad de erección. En ratas, latécnica alcanza tasas de éxito deentre el 70 y el 85%. Las técnicasde TG han sido también empleadaspara revertir la infertilidad en ratones machos, que se convirtieron enfértiles sin que el gen o el vectorlentiviral introducido se transmitiese a su descendencia. Los ratonestratados presentaban dificultad en laformación de células espermáticasdebido a ciertas mutaciones en elgen KL2 de sus células de Sertoli.DolorPo r  úl t imo ,   l a  TG ha   r e a l i z adoincursiones en el campo del dolor.Así, la expresión de forma continuada de preproencefalina en neuronassensitivas abre las puertas a aplicaciones clínicas en el tratamiento deldolor asociado al cáncer, artritis,angina y neuropatías periféricas. LaTG, al ser específica, permite que laliberación de sustancias analgésicasse produzca tan sólo en los lugaresde la hiperestimulación, evitando laaparición de efectos secundarios delos narcóticos como la confusiónmental y el letargo.Aunque en este trabajo hemosdado una visión de la TG sólo en elLa TG viene a aumentarel abanico terapéuticodisponible en la actualidad en la insuficiencia cardíaca,abriendo las puertas a un nuevo tratamientoque tiene como diana a la proteína fosfolambanGENÉTICA150 OFFARM  tratamiento de enfermedades hereditarias, la ingenieríagenética desde su inicio se ha utilizado para sintetizar,y en algunos casos liberar, proteínas con fines terapéuticos. La modificación genética de vegetales y animalespermite, no sólo mejorar sus rendimientos o resistencias frente a plagas o inclemencias naturales, sino también la producción de proteínas de interés farmacéutico. Así, los animales transgénicos constituyen unaalternativa tremendamente interesante para la industria farmacéutica. Las granjas transgénicas farmacéuticas empiezan a ser realidad y las principales compañíasdel mercado biotecnológico ya han puesto en marcha,de forma experimental, la obtención de proteínas forá-neas (alfa1-antitripsina, fibrinógeno, lipasas BGL, lact o f e r r ina )  de   l a   l e che  de   r ebaño s   t r ansgéni c o s ,   ycomienzan a ser realidad las patatas transgénicas queinmunizan contra el cólera o diarreas bacterianas, y elarroz, capaz de producir provitamina A, con la que sepretende evitar los problemas de ceguera asociados adietas basadas en este cereal. Este artículo nos ha dado una idea global de cómo laTG se erige en la actualidad farmacológica como una delas formas más prometedoras de terapéutica. Si bien laTG ha abierto nuevas perspectivas al tratamiento demuchas enfermedades, ésta no es una técnica generalizable o la panacea para todas las enfermedades, por loque tendrá que limitarse, ya que el éxito de su aplicación no reside en la técnica, sino en la enfermedadmisma.